使用細胞凍存液,你需要注意這些事項!
更新時間:2021-06-30 點擊次數:1420次
為了將每一種有生命的細胞較好的保存其原有的細胞特性或者長久的保存種質資源,實驗人員往往將細胞用特殊配置的
細胞凍存液保存,使得細胞暫時脫離生長狀態(tài),等到實驗需要的時候再從液氮中取出復蘇應用。
細胞凍存液凍存細胞健康程度一般要求活細胞在95%以上,細胞活力差的在凍存后的成活機率很小,因此,一定要在細胞旺盛分裂時期凍存。凍存液凍存需要一段時間,如果這段時間凍存管傾斜,液體容易流到管口,很容易在后續(xù)的操作中造成污染。具體操作時,凍存管直立起來放在冰箱里,這樣不容易造成污染。同時凍存細胞的時候,一定加上封口膜,這樣可以避免復蘇的時候,水浴箱里的水進入蓋子的縫隙中。凍存管外面用封口膜封上后,最好再用白膠布再封一下。這樣可以防止細胞復蘇時,封口膜崩裂,水浴箱中的水進入凍存管。
細胞凍存液的使用注意事項:
1.使用前,不需要進行高壓滅菌,它本身就有滅菌的作用。高壓滅菌反而會破壞它的分子結構,以至于降低冷凍保護效果。
2.在常溫下,DMSO對人體有害,故在配制時最好戴上手套操作。
3.混合DMSO要快,因為DMSO對細胞有毒性,混合之后應盡快凍存,提醒各位注意的是加入凍存液后一定要混勻,防止DMSO沉淀。
4.凍存液比例培養(yǎng)基7:血清2:DMSO1,也有將血清比例加大的做法,有的甚至將血清提高到90%,具體濃度視經驗而定。
5.可以先在泡沫上打孔,把凍存管塞進去。這樣降溫可以慢一點,當然包上棉花也是不錯的主意。
6.注意定期檢查液氮罐內液氮量,及時添加。