無血清細胞凍存液的制備方法是什么？
更新時間：2023-05-16 點擊次數(shù)：1200次
無血清細胞凍存液是一種常用的細胞保存方法，適用于多種類型的細胞，并且可以長期保存在低溫條件下。
1.準備培養(yǎng)基
最好使用不含血清的培養(yǎng)基，以減少凍存液中可能存在的血清對細胞存活性的影響。使用無血清培養(yǎng)基時需要注意，必須添加適當?shù)臓I養(yǎng)物質(zhì)和生長因子來維持細胞的生長和代謝。
2.細胞檢測
檢查所需保存的細胞是否符合要求，如細胞的外觀、生長狀態(tài)、染色體數(shù)目等。如果細胞有任何異常，就需要進行處理或舍棄。
3.細胞收集
將細胞從培養(yǎng)皿中收集，可以通過倒置培養(yǎng)皿、利用細胞刮片或使用細胞收割機來完成。在收集細胞時需要注意避免損傷細胞膜。
4.細胞計數(shù)
使用細胞計數(shù)器或顯微鏡計數(shù)室對細胞數(shù)量進行計數(shù)。確保細胞密度適當，通常建議細胞密度在200,000-500,000個/ml。
5.細胞離心
將細胞離心，去除培養(yǎng)基，并用一些無菌的生理鹽水或磷酸緩沖液洗滌細胞，以去除殘留培養(yǎng)基和細胞碎片。
6.細胞懸液制備
加入適量的凍存液(通常為含10%甘油和90%培養(yǎng)基的混合物)到細胞懸液中。混勻后分裝到無菌凍存管中，每支管放入1-2ml的細胞懸液。
7.細胞冷凍
將分裝好的細胞懸液放置于冰鹽混合物(-80℃)中快速冷凍，避免出現(xiàn)晶體形成。在冷凍過程中應(yīng)該盡可能地減少對細胞的損傷。
8.細胞儲存
將已經(jīng)冷凍的細胞轉(zhuǎn)移到液氮罐中進行長期保存，避免溫度波動和污染。每次需要使用時，應(yīng)該迅速將凍存管從液氮罐中取出并進行解凍處理。
總之，制備無血清細胞凍存液需要嚴格控制細胞密度、培養(yǎng)基組分和處理過程中的溫度等多個因素，以確保細胞能夠正常存活并長期保存。
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